SARS-CoV-2 Nucleïnezuur-testkit

Beoogd gebruik:

SARS-CoV-2 Nucleic Acid Test Kit is van toepassing op de kwalitatieve detectie van nucleïnezuur van COVID-19 in nasofaryngeale uitstrijkjes, orofaryngeale uitstrijkjes en sputum. De testresultaten bieden een moleculaire diagnosebasis voor infectie of verdachte patiënten en mogen niet worden gebruikt als het enige criterium voor klinische diagnose.

materialen:

Test procedure:

A. Monstervoorbereiding

Geëxtraheerd RNA is het uitgangsmateriaal voor de SARS-CoV-2 Nucleic Acid Test-kit.

Belangrijk: Elke nucleïnezuurextractieprocedure moet gelijktijdig worden uitgevoerd met één positieve controle (40 L, verdunnen met steriele zoutoplossingen/PBS tot het gewenste volume) en één negatieve controle (40 μL, verdunnen met steriele zoutoplossingen/PBS tot het gewenste volume).

Het wordt aanbevolen om de volgende commerciële nucleïnezuurextractiekits te gebruiken: PureLinkTM Viral RNA/DNA Mini Kit (Invitrogen); Virale RNA-minikit (QIAGEN); TIANamp Hi-DNA/RNA-kit (TIANGEN);

B. Reactiemix instellen

1. Alle reagentia en monsters moeten vóór gebruik volledig worden ontdooid, volledig worden gemengd en kort worden gecentrifugeerd bij kamertemperatuur (ongeveer 18 tot 25 graden).

2. Bereid het vereiste volume van het reactiemengsel in een polypropyleen microcentrifugebuis van geschikte grootte.

3. Pipetteer 25 µL van het reactiemengsel in elk vereist putje van een geschikte optische 96-well-reactieplaat of een geschikt optisch reactiebuisje.

C. Sjabloontoevoeging

1. Voeg 5 μL geëxtraheerd RNA uit monsters/positieve controle/negatieve controle toe. Het totale volume is 30 L.

2. Meng de monsters en controles grondig met de reactiemix door op en neer te pipetteren/vortex.

3. Sluit de 96-well-reactieplaat met geschikte deksels of optische zelfklevende film en de reactiebuizen met geschikte deksels.

4. Centrifugeer de 96-well-reactieplaat in een centrifuge met een microtiterplaatrotor gedurende 30 seconden bij ongeveer 2500 rpm.

D. Programmeren van het real-time PCR-instrument

Raadpleeg de gebruikershandleiding van het betreffende instrument voor basisinformatie over het instellen en programmeren van de verschillende realtime PCR-instrumenten. De test is geoptimaliseerd voor het ABI7500 Real-Time PCR-systeem. De PCR-run wordt uitgevoerd onder cyclusomstandigheden zoals beschreven in de onderstaande tabel.

Definieer de fluorescentiedetectoren

*Stel de interne fluorescentiereferentie van het instrument in op "None", bijvoorbeeld: Voor instrumenten uit de ABI-serie stelt u "Passive Reference" in op "None".

E. Gegevensanalyse

Stel de analyseparameters in en analyseer de gegevens volgens de gebruiksaanwijzing van de relevante instrumenten.

Neem ABI 7500 als voorbeeld:

De basislijn moet worden ingesteld op een bereik dat de achtergrondfluorescentie elimineert die wordt aangetroffen in de vroege cycli van amplificatie, maar dat het gebied waar de amplificatiesignalen boven de achtergrond uitkomen niet overlapt (Beginwaarde:3~10; Eindwaarde: {{2} }). De Cycle Threshold (Ct) moet zich in de basis van de exponentiële fase bevinden. Klik op "Analyse" om het analyseresultaat automatisch te verkrijgen en lees het detectieresultaat in het venster "Rapport".

Populaire tags: sar - cov-2 nucleïnezuur zuur testen uitrusting, China, leveranciers, fabrikanten, fabriek, massa